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【摘要】目的 評價貝克曼全自動化學發光免疫分析儀檢測甲狀腺激素的效果。方法 測定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,分別計算批內精密度、批間精密度、回收率和線性范圍。結果 T3、T4、FT3、FT4、TSH的批內精密度分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%,批間精密度分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%,回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%,線性范圍分別為0.15～12.3 nmol/L、3.9～387.0 nmol/L、0.3～30.8 pmol/L、1.3～155.0 pmol/L、0.01～150.0 mIU/L。結論 貝克曼全自動化學發光免疫分析系統測定甲狀腺功能具有重復性好、準確度高、可報告范圍寬、測定速度快等優點,適合于臨床應用。
【關鍵詞】化學發光免疫分析法;甲狀腺激素
化學發光免疫分析法是20世紀80年代以來發展起來的一項新的標記免疫技術,在臨床上有廣泛的應用,包括內分泌激素、腫瘤標志物、血藥濃度、傳染病、心血管疾病標志物、貧血及過敏原等,特別是在甲狀腺激素檢測中應用更為廣泛[1]。本文采用貝克曼全自動化學發光免疫分析儀檢測T3、T4、FT3、FT4、TSH,對其方法學進行綜合評價。
1 材料與方法
1.1 儀器貝克曼全自動化學發光免疫分析儀。
1.2 試劑發光試劑、質控品、標準品由貝克曼公司提供。
1.3 血清來源試驗所需血清樣本采自本院門診和住院患者,每例取3ml血,離心3000 r/min,10分鐘,取血清-70℃保存備用。
1.4 檢測方法利用化學發光技術和磁性微粒分離技術相結合的測定方法,其反應原理與放免和酶免中的雙抗夾心法、競爭法相似,嚴格按試劑盒操作說明書操作。
1.5 評價指標
1.5.1 批內精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本,每種濃度同批平行測定10次,計算平均變異系數(CV)。
1.5.2 批間精密度取含T3、T4、FT3、FT4、TSH高、中、低三種濃度的血清樣本各10份,每天各測定1次,共測定10天,計算平均變異系數(CV)。
1.5.3回收率:由貝克曼公司提供原裝3個濃度的標準品,分別測定T3、T4、FT3、FT4、TSH含量,每個濃度平行測定3次,計算平均回收率。
1.5.4 線性范圍收集患者血清標本,取T3、T4、FT3、FT4、TSH濃度高于廠家提供線性范圍上限作為高值濃度水平(H),廠家提供稀釋液作為低值濃度水平(L),用稀釋液稀釋高值濃度血清,形成如下系列濃度檢測標本:1H+0L、4H+1L、3H+2L、2H+2L、2H+3L、1H+4L、0H+1L。用配制成的系列濃度標本平行測定各項指標含量,取平均值作圖,取在坐標紙上呈明顯直線趨勢的各點值進行直線回歸統計,取回歸系數r大于0.9的濃度范圍為可報告的濃度線性范圍。
2 結 果
2.1 批內精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數分別為4.40%、4.90%、3.00%、4.50%、3.50%。
2.2批間精密度T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均變異系數分別為6.90%、5.30%、3.50%、6.20%、4.80%。
2.3 回收率T3、T4、FT3,FT4、TSH的平均回收率分別為96.7%、95.5%、97.1%、95.6%、96.4%。
2.4 線性范圍T3所測結果得到回歸方程為y=1.069x-0.2468,r=0.9966,截距經t檢驗,ta=1.36,0.95,截距經t檢驗,ta=0.36,
3 討 論
血清中三碘甲狀原腺氨酸(T3)、四碘甲狀原腺氨酸(T4)、游離三碘甲狀原腺氨酸(FT3)、游離四碘甲狀原腺氨酸(FT4)、促甲狀腺激素(TSH)的測定對甲狀腺疾病的診斷具有重要價值。以往國內實驗室多采用RIA、MIRA檢測血清甲狀腺激素水平,此法雖較準確,儀器與試劑也較為低廉,但對操作人員水平要求較高,對實驗條件及環境有較多要求,且隨著標記抗原的放射性衰減,而使計數不穩定及曲線失真,導致結果偏離,結果重復性差,且可產生放射性污染[2,4]。
近年來發展起來的全自動化學發光免疫分析系統是利用化學發光技術和磁性微粒分離技術相結合的測定方法,其反應原理與放免和酶免中的雙抗體夾心法、競爭法相似。其優點是[3,5]:(1)成熟的單克隆抗體技術或獨特的磁性微粒子技術,保證了反應的高特異性;(2)檢測范圍寬,具有良好的稀釋線性;(3)試劑穩定性好,不需酶促反應,有效期可長達半年;(4)操作簡便,分析過程采用全自動化,減少了人工操作誤差,重復性好;(5)試劑及標本均采用無吸附材料,故相互間的交叉污染率低,干擾因素少;(6)真正的隨機連續檢測,樣本隨到隨測,具有急診優先插入功能。因此全自動化學發光免疫分析系統是目前檢測甲狀腺激素等指標的較好方法。
【參考文獻】
[1] 陶義訓.免疫學和免疫學檢驗[M].第1版.北京:人民衛生出版社,1997:174.
[2] 葉任高,陸再英.內科學[M].第6版.北京:人民衛生出版社,2004:725.
[3] 羅煒,王慧,陳柏銘.化學發光免疫法與放射免疫法測定血清AFP的比較[J].上海醫學檢驗雜志,2000,15(3):149.
本文闡述在ARCHITECTi2000SR全自動化學發光免疫分析儀應用實踐中進行使用方法的改良，極大地方便了儀器操作者的使用，有效地避免了使用過程中的差錯的發生。解決故障的過程有助于思路的擴展，對使用其他的檢驗儀器有很好的啟發作用和較大的參考或應用價值。
關鍵詞：全自動化學發光免疫分析儀；標本容易加錯現象；標本識別移位故障；改良方案
【中圖分類號】
R249 【文獻標識碼】B 【文章編號】1002-3763（2014）07-0272-01
Architect i2000SR全自動免疫分析儀是由美國雅培公司研發的第三代大型全自動免疫分析儀，采用化學發光的原理進行檢測，具有較高的靈敏度、特異性和穩定性，具有檢測速度快，測量范圍寬廣等諸多優點，且可與生化模塊C8000相連。且檢測試劑穩定并易于進行室內與室間質量控制。然而全自動化儀器的高故障率亦對檢驗技術人員提出了更高標準的要求。本文即是作者在雅培i2000SR全自動化學發光免疫分析儀應用實踐中遇到的：容易出現加錯標本，和機器本身出現標本識別移位的故障現象，分析其原因、探討改造方案并付諸實踐成功解決故障的過程，以便應用到其他的現代化的檢驗設備使用中去。
1 標本容易加錯的改良方案
1.1 標本容易加錯的現象：
由于該機器的原來的設計是每個標本架只有5個孔，也就是每個標本架只能放置5個標本，這樣就使使用者放置標本時，必須要好好的記著所加標本的原來的編號，待放到架子上時要好好的計算出標本的位置是在第幾個架子、第幾號位置編號。譬如：手里拿著16號標本需要放置到標本架子上時，就必須計算出是第4個架子的第1號位置才是16號的位置。是非常的不方便吧？
1.2 標本容易加錯現象的解決方案：
因為我發現了這個非常不容易計算出所要加的標本位置，并且又很容易加錯標本，工作起來非常不方便的現象時，就一直在腦子里尋求一個解決這個問題的方案。
不久我就想出來了個解決的辦法：那就是在每個標本架的靠近1號位置端，設計出了一個不干膠貼，上端標明1、2、3、4……架子號順序號，下端標明該架子的5個標本號在該架子上的應有的順序范圍。詳見附圖1改造后的第一個托盤俯視圖
2 標本識別移位故障的改良方案
2.1 故障現象：
應用ARCHITECTi2000SR全自動化學發光免疫分析儀進行批量編程，每個標本架放置5個標本，每5個標本架為一組，每一組用一個托盤托起，即標本號依次為1-25、26-50、51-75、76-100四組。在全部標本儀器檢測完成后，對HBsAg陽性標本利用金標法復查時，偶然發現陰陽性結果極為不符合的現象。遂對每個標本對應的架號、位置、結果逐一排查，發現個別標本架上的標本并沒有消耗（即沒有被取樣），但卻賦上了數值。經逐一檢查儀器所加樣本與操作者編程的標本架號位置明顯不同，即發生了跳躍，如31號標本所賦值實為36號樣本測試值或其它樣本值。
2.2 故障分析：
經與使用ARCHITECTi2000SR全自動化學發光免疫分析儀的兄弟單位工作人員及雅培中國工程師溝通，了解其工作過程原理是：利用ARCHITECTi2000SR化學發光免疫分析儀批量編程1-25、26-50、51-75、76-100號標本架號位置后，儀器會首先會進行標本架條碼掃描，同時也給每個標本進行掃描。如果某個標本架的條碼沒有掃描到，則機器會自動順延一個標本架進行操作，這樣就會出現跳架移位現象，也就是我們上述的故障現象。譬如儀器在批量編程，31-35號標本架的條碼掃描過程中沒有掃到，儀器則默認該架子不存在，標本也不存在，跳過了該標本架，將36-40號標本架或及其它標本架上的標本默認為31-35號標本。以后的標本均以同樣的方法順延賦值，即后面的所有標本均順延了5個號碼，如不復查而直接報告傳輸的結果，必然出現張冠李戴的嚴重后果。上述現象并非偶然，隨著工作量的增加，出現的頻率越來越高，為日常檢驗工作帶來相當大的不便，工作人員往往會花費很大的時間和精力，去排查或復查標本與結果是否相符，一度認為此儀器的標本識別和處理軟件系統存在巨大缺陷。
3 標本識別移位故障的解決方案
通過細致的觀察分析、嚴密的科學探討和積極的創新實踐，我們對ARCHIT -ECT i2000SR全自動化學發光免疫分析儀的進樣系統，進行了簡單而合理的改良，使上述故障得以完全解決。具體方法如下：
準備100個改造過的與架同高的平口空試管（以合適放置加樣杯為宜），利用條碼機打印1-100編號號碼的條碼，分別貼在每個試管上條碼器能夠掃描到的位置。將這些貼有條碼的試管按順序放置在標本架上，并保持條碼向外，易于條碼系統識別判讀；實驗操作時只需將加樣杯放置在對應貼有條碼的試管上即可。請注意：只需更換加樣杯加病人血清標本。更多的標本亦可用類似方法粘貼上1-100或更多的試管條碼。
詳見附圖1 圖2所改造的H540試管架俯視圖和側視圖
經過如此改良，儀器在進行標本架條碼掃描時，同時也會給每個試管條碼進行掃描，如果其中某個標本架條碼漏掃，但仍會掃描到試管上的條碼號，機器則自動的默認標本架的存在，就不會出現跳架移位的現象。
4 思路擴展與推廣應用
標本容易加錯的解決方案：就是以較小的改造或改良，而改變了原來的設計的不足，避免了工作中容易出現的錯誤。像這種小的改造可以用到大多數的試管架子是5個試管位置的大型生化分析儀、放免分析儀等的儀器上。
標本識別移位故障的解決方案：類似的跳架移位故障，不僅出現在ARCHIT -ECTi2000SR全自動化學發光免疫分析儀上，在其它設備上，譬如ARCHITEC -Ti4000SR等儀器亦會出現，亦可采用此法進行改造或改良。兄弟單位同類儀器或不同品牌的儀器，出現類似的因為批編程而出現的跳架移位故障亦可借鑒此方法一試，以避免出現數據移位錯誤，為臨床提供準確的檢驗信息。
[中圖分類號] R446 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-9701(2009)23-114-01
全自動生化分析儀目前已在各醫院檢驗科大量應用,在檢測病人標本時,有時存在一些交叉污染的現象,使檢測結果的可靠性受到一定程度的影響。筆者結合自己的實際工作,探討一些交叉污染的來源及如何避免的對策,希望能夠引起檢驗人員的重視,以減少此類交叉污染對檢測結果的影響。
1 交叉污染的來源
所謂的全自動生化分析儀就是完全模仿人的手工操作,將加樣品、加試劑、混合、攪拌、保溫、測試、打印結果等一系列過程自動化操作的過程。無論任何一款生化分析儀都有共用樣品吸樣針、試劑吸樣針、攪拌棒以及比色杯這一特點。當生化分析儀連續長期使用一定時期后,其清洗和洗滌效果下降了,加上比色杯老化后粘附能力增加了,工作人員維護保養不及時,勢必會引起交叉污染的現象,影響檢測結果的準確性。
1.1 比色杯的交叉污染
每個比色杯檢測完畢后,進行反復清洗,然后繼續下一個項目的檢測,如果某個比色杯清洗不完全時或粘附力增加時,吸附在比色杯上樣品或試劑殘留,就會對在這個比色杯中進行的下一個項目的檢測結果造成影響。
1.2 加樣針的交叉污染
如果加樣針清洗不完全時或粘附力增加時,殘留在加樣針內、外壁上的樣品或試劑就會對下一個檢測項目造成影響。
1.3 攪拌棒的交叉污染
如果攪拌棒清洗不完全時,粘附力增加,殘留在攪拌棒上樣品或試劑就會對下一個檢測項目造成影響。
全自動生化分析儀的交叉污染無外乎以上三種,其中第1種比色杯的交叉污染最為嚴重。另外,比色杯最難以清洗,另外,比色杯一般都是密閉的,難以用肉眼直接觀察其清潔度。
2 如何避免交叉污染
無論來自何種原因的交叉污染,主要都是由前一個測試樣品或試劑對相鄰下一個檢測所造成的影響。前一個樣品造成的交叉污染較容易判斷及分析,我們直接可以從屏幕上顯示的測試結果來判斷,例如:一個樣品的測試結果比較高,下一個相鄰測試樣品的相同項目測試結果如果也同樣比較高,那么就要引起操作人員的高度重視,分析測試結果是否存在由前一個樣品造成的樣品間的交叉污染造成的假性增高。
試劑間的交叉污染不容易判斷及分析,原因是試劑成分較復雜,各個公司所提供的試劑說明書不能夠全面反映試劑組成的情況,而且是否由哪一種試劑造成的交叉污染,不如樣品間交叉污染那么直觀地顯示出來,往往隨著樣品測試項目多少不同,造成的影響也不同。質控品往往在控,交叉污染具有偶然性,并不是每次都出現。當按照日常的分析順序出現異常結果時,將出現異常結果的分析項目單獨進行復檢,復檢后結果正常,多數是由于試劑間交叉污染所致的。我們重點講述如何避免各類交叉污染[1]。
大型的全自動生化分析儀,由于樣品加樣針、試劑加樣針多數是雙針或四針的,個數較多,加上有較多沖洗步驟(有的8～10沖洗步驟);中、小型全自動生化分析儀樣品加樣針、試劑加樣針個數較少,沖洗步驟較少,攜帶污染率較高,如何把交叉污染控制到最低,不至于影響測試結果,才是至關重要的,本人認為應從以下幾個方面作起。
要求操作人員對全自動生化分析儀作好維護和保養工作,包括每日、每周、半個月、每月、半年、每年,要嚴格按照程序進行維護和保養工作,防患于未然。每天開始工作前要詳細檢查加樣針、攪拌棒、沖洗頭部件是否有臟物粘附,及時拆下來進行清洗和擦拭。要定期地檢查比色杯的清潔情況,必要時進行手工清洗。要求操作人員對生化分析儀的工作流程、項目的測試原理、測試試劑的組成了如指掌,合理地設計參數及程序,盡可能地避免交叉污染[2]。合理地安排檢測項目的測試順序,將易發生交叉污染的項目隔開,在有交叉污染的項目中間插入一個或兩個非污染項目,有的生化分析儀可采用內、外圈分開來避免,因儀器及試劑的種類繁多,無法固定好項目測試順序,操作人員長期摸索出一些經驗。使儀器報出準確、可靠的檢驗結果。盡可能地選用抗交叉污染的試劑盒。以上幾點都注意后,交叉污染的現象仍無法消除時,可對分析儀的樣品加樣針、試劑加樣針進行特殊的沖洗,增加沖洗次數,必要時用堿性清洗液及酸性清洗液沖洗,可以有效地避免交叉污染。當然這樣會大大地降低生化分析儀的測試速度。
總之,全自動生化分析儀給我們檢驗工作帶來方便,同時隨著分析儀的連續使用,其性能有所下降,也存地著一些問題。因此需要我們操作人員理論聯系實際,摸索出適合本室工作的一套經驗,使得測試結果有高度的準確性和可重復性。
[參考文獻]
[1] 于雷. 生化自動分析儀項目間試劑的交叉污染及其避免方法[J]. 臨床檢驗雜志,2003,(3):168.
doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2010.17.168
工作人員英語水平及業務素質的要求
人員的因素是保證生化檢驗質量的前提。醫院各級領導要提高認識,引起重視。進口全自動生化分析儀的操作界面大都是英文,對工作人員的英語水平就要有一定的要求,以適應工作的需要,科室領導要能合理安排工作人員;經過專門的技術培訓,應掌握儀器的性能工作原理,儀器的參數設置和試劑的準備,熟悉儀器各部件結構,儀器的保養與維護及一般故障的排除,培訓完畢考核合格后才能上崗。近兩年,我國正在逐步實行大型儀器使用培訓的上崗考核制度,這也能進一步提高我們工作人員的業務素質。
為全自動生化分析儀提供良好的工作環境
全自動生化分析儀的運行必須要有一個好的工作環境。包括穩定的電流、電壓和接地保護的電源系統。適應儀器工作范圍的溫度和濕度,實驗室的潔凈度等。應當配置UPS保護電源,用來應對突然斷電的情況。要有一個相對獨立穩定的工作環境。任何環境的變化都有可能影響到儀器的穩定性,從而影響到檢測結果的精密度和準確度,因此要及時觀察做好記錄以便出現問題及時得到糾正。
全自動生化分析儀的維護與保養
全自動生化分析儀的維護與保養包括儀器的清潔、清洗液的配制、每天光度計的檢測,杯空白的測定、每天開機、關機對石英比色杯的清洗,加樣針頭的定期徹底清理等。工作人員應有高度的責任心,嚴格按照操作規程操作。儀器在使用間隔一段時間后,要為其工作軸承元件抹油,保護工作元件的正常運行。建議在每隔一年使用期限與供應商取得聯系,派專職的工程師為儀器做一個全面的保養以維護儀器的性能穩定及延長儀器的使用壽命。同時每年定期對儀器進行了校準,以保證其靈敏度達到試驗的要求。
標準品的正確選擇和使用
由于生化試劑存在批間差異,在使用不同批次的試劑時,應及時校準儀器。實踐證明,使用定值洪凍干標準血清比使用水溶液標準要好,原因可能是定值凍干血清與樣品(血清)成分更接近,水溶液標準不具有血清的黏稠性,在吸樣針吸樣時血清與水溶液在吸樣針的黏度不一樣會造成誤差;另一方面反應速度不同,水溶液反應速度比血清快,而造成誤差。在使用定值凍干標準血清時,準確吸取重蒸水稀釋復溶,輕輕顛倒混勻,避光放置30～60分鐘使用。
試劑的管理
目前試劑種類較多,儀器配套試劑、進口試劑、國家試劑等等,不同的生產廠家、不同型號的全自動生化分析儀對試劑的要求不完全相同。原則是建議使用儀器配套的系列試劑產品。使用其他試劑,應先進行樣準,使儀器性能做到最佳。總的來講,進口試劑優于國家試劑,表現在試劑的穩定性、線性,儲存使用前配置等。試劑的存放要有專用冰箱,建立冰箱溫度每日登記制度,以保證試劑的貯存條件達到要求,對試劑要定期清理,及時處理過期試劑。
完善室內質控制度
室內質控是各實驗室為了監測和評價本室工作質量,以決定常規檢測報告能否發出所采取的一系列檢查、控制手段。旨在檢測和控制本室常規工作的精密度,并檢測其準確度的改變,提高本室常規工作中批間和日間標本檢測的一致性。因此,室內質控工作每天必不可少。一段時間內必需選擇同一廠家性能穩定的質控品。質控品的穩定性受到多種因素影響,比如質控品的運輸條件、貯存條件、檢測條件等。在試劑質量和標準品得到保證的前提下,對每一批質控品多次檢測,獲得本室的檢測均值作為其靶值,建立本室的質量控制體系,廠家經出的靶值可作為參考。為了避免有些標本結果偏離線性范圍而導致失控,應采用高、低不同濃度的質控血清。在完善室內質控的基礎上積極參加室間質評,只有認真做好室內質控才能保證獲得好的室間質評成績。
正確對待室間質量工作及反饋的信息
目前在我國的醫院等級評審制度中將檢驗科室間質評成績作為醫院達標的指標之一。室間質量評價由第三方機構采用一系列的辦法連續地、客觀地評價各實驗室的試驗結果,并發現實驗室本身不易發現的不準確性,了解各實驗室之間結果的差異,幫助其校正,使其結果具有可比性。我們在認真做好室內質控的同時[1],一定要正確對待室間質評工作及反饋的信息。每次室間質都要由科室認真獨立完成,并如實報告檢測結果。當收到反饋單后要認真分析反饋單中所反映出的問題,積極查找原因,采取措施提高測定結果的準確性,提高不同實驗室之間測定結果的可比性。
標本分析前的質量管理
標本分析前的工作由各科醫師、護士及檢驗科人員等共同完成。因環節較多是很容易出問題的,也是全面質量控制工作中最難控制的環節,我們要主動與臨床溝通,包括患者的準備、標本采集的方法、數量,特殊樣品的留取、按時送檢等。當檢驗科工作人員接到標本時要認真核對,不合格的標本要重新采集。發現標本有黃疸、脂血、溶血等對檢測結果有影響的情況,應注明在報告單上,以便醫師在分析報告時可結合標本信息去分析。
建立檢測結果審核制度
在審核報告單之前,要認真分析室內質控情況,對當天檢測結果的可信度作出判斷,對報告單逐一審核,檢查數據有無不合理的情況。符合復查條件的一定要進行復查后再發報告。遇到特殊情況,應與臨床及時溝通,查找原因,確保結果的可靠性。
以上幾個方面是一個整體,分析前、中、后環環相扣,缺一不可,只有全面做好各環節的質量管理,才能為患者發出真實可靠的報告[2]。
參考文獻
關鍵詞：EIP協議；自動化；通信平臺
中圖分類號：TP273.5 文獻標識碼：A 文章編號：1674-7712 （2014） 12-0000-01
一、基于EIP協議的綜采自動化系統通信平臺的研究
（一）EIP協議概述
EtherNet/IP（Ethernet Industrial Protocol）技術是包含EtherNet/IP，DeviceNet，ControlNet等多種協議的CIP（通用工業協議）技術與以太網技術的巧妙結合，它基于標準的TCP/IP協議，只是在TCP或UDP報文的數據部分嵌入了CIP封裝協議，封裝協議的主要任務是定義和規范了如何封裝和傳輸上層協議報文，以及如何管理和利用下層TCP/IP連接，起到承上啟下的作用目前，EtherNet/IP己經成為國際標準，在世界上已經得到數以百計的廠商支持，國際上ODVA、CI、IAONA和IEA，也一直在進行EtherNet/IP的技術開發和管理工作。相應開發工具可以從和中獲得。
（二）EtherNet/IP協議通信原理
CIP控制和信息協議是EtherNet/IP的特色，該協議既提供實時的I/O通信功能，又實現數據信息的對等傳輸功能，其控制模塊利用隱形報文來實現實時的I/O通信功能，信息模塊則利用顯性報文實現非實時狀態的信息交換功能。CIP協議的一個非常重要的特點是介質的無關性，即實施CIP應用層協議時與底層介質無關，這使得人們能夠在控制系統和I/O設備上隨意實施這一開放協議。與源/目的通信模式有很大不同，EtherNet/IP協議采用的是生產/消費的模式，即允許網絡上的節點存取數據時可以同時存取來自同一個源的數據。在新的生產/消費的模式中，數據會被附加上一個屬于自身的唯一標識，數據源將把數據一次性發送到網絡，節點可以選擇性地對這些數據進行讀取，這樣大大提高了數據的傳輸效率。
（三）EtherNet/IP協議的特點
1.Ethernet/IP協議兩類報文
（1）隱式報文：主要用來傳輸系統中的實時I/O數據、功能性安全數據和系統動作控制數據等周期實時性數據。采用以太網中的UDP協議，將UDP報文映射到IP多播傳送，實現高效I/O交換，有力的支持了生產者/消費者通信模式；（2）顯式報文：主要用來傳輸系統中的配置、診斷、狀態等非周期、非實時性的數據。采用以太網中的TCP協議，利用TCP的流量控制和點對點特性能夠對特定的節點進行信息獲取。
（四）EtherNet/IP的優點
EtherNet/P的顯著優越性在于融合了Ethernet和TCP/IP技術。另外，專門用于工業控制設計的應用層協議CIP也被吸納到商業以太網中來，提供訪問數據和用于控制設備操作的對象集。EtherNet/IP的優越性可歸納如下：
（1）設備間一致性。EtherNet/IP解決了網絡設備之間互操作難的問題，這歸功于網絡設備共同遵守一致的規范，可以相互傳送具有明確含義的信息；（2）易集成性。由于EtherNet/IP使用標準的TCP/IP以太網，便于通過Internet對企業進行管理；（3）廣泛的支持性。EtherNet/IP應用層采用CIP協議很明顯的好處是與ControlNet和DeviceNet使用相同的共享對象庫和設備規范，具備了最廣泛的支持性；（4）同步和安全技術。前沿同步技術在EtherNet/IP的應用使得同步精度不超過100ns，而尖端安全技術實現了不間斷地系統集成，并且能夠在同一網絡上同時運行安全設備和標準。
二、技術展望
（一）EIP技術在綜采自動化系統中應用前景分析
綜采工作面是煤礦生產最前沿的工作環節，也是最復雜的工作環節。其設備數量多，設備之間互相制約、相互協調，任何單一設備都無法脫離其它設備而單獨完成任務。此外，隨著國內外綜采工作面設備自動化技術水平的發展，以及實現綜采自動化、無人化的目標，也都是建立在各個綜采設備間大數據量的高速、準確、可靠的信息交互的基礎上的。當前綜采自動化系統的通信平臺存在設備間協議“各自為政”和通信協議安全性、準確性和鏈路帶寬低的問題，迫切需要制定一種適用于各設備之間能夠自由開放的、高速穩定的交互數據的統一的通信協議。
（二）基于EIP技術的綜采自動化系統通信平臺的發展
近年來，隨著“無人化”開采以及數字礦山的技術的發展，以及十二五期間國家對煤炭安全生產的高度重視，各大煤礦集團都越來越加大對煤炭自動化、無人化開采的投入，不可避免的對綜采工作面的自動化水平要求越來越高，而綜采自動化系統水平的提高是建立在綜采設備大量數據的基礎上的。因此，這就要求綜采自動化系統的通信平臺能夠具備以下幾點特性：
（1）大數據量、遠距離傳輸：能夠很好的支持綜采工作面自動化系統，乃至整個數字礦山的實現；（2）高度的開放性：能夠支持綜采自動化系統中任意設備的快速方便的接入；（3）協議的一致性：實現綜采工作面各設備乃至整個礦山設備的通信協議的一致性；（4）數據傳輸的高速、穩定和安全性：為了保證自動化系統安全可靠的運行，必須保證在通信平臺上傳輸數據的高速、穩定和安全。
三、結束語
本文提出的基于EtherNet/IP協議的新一代綜采自動化系統通信平臺方案，充分利用CIP和工業以太網技術提高煤礦通信系統的實時性、可靠性和開放性，為實現煤礦少人、無人開采和安全開采的目標打下了基礎，具有很大的實際應用價值。
在醫學高速發展的今天，隨著先進技術的不斷引入，臨床醫學檢驗獲得日新月異的發展：高速度生化分析儀的裝備，解決不斷增長的檢測量的壓力；更靈敏的化學發光技術及后續研發投入，深刻地影響和拓展著免疫學檢測領域的廣度和深度；分子生物學技術、基因芯片、蛋白芯片技術的發展，必將會引領臨床醫學檢驗的全新變革，使得個性化的疾病診斷、治療成為現實。
全實驗室自動化（total laboratory automation，TLA）又稱全程自動化（front to end automation） 是將臨床實驗室中各種獨立的自動化儀器以特殊的物流傳送設備串聯起來，在信息流的主導控制下，構成流水線作業的組合，形成大規模的全實驗室常規檢驗過程的自動化，國內也有稱臨床實驗室自動化檢驗流水線。
基本結構：
1.標本運輸系統（sample transportation system， STS）
1.1傳輸系統負責將樣品從一個模塊傳遞到另一個模塊。
1.2現有的產品可分為兩大類： 智能化傳輸帶和智能自動機械臂，每一類中又有多種規格。
2.標本前處理系統（sample pre-analytical moudular system， PAM）
前處理工作站包括：
1.樣品分類
2. 自動裝載和樣本離心
3. 樣本去蓋
4. 樣本再分注及標記
3.自動化分析儀（automated analyzer）
4.分析后處理輸出系統
輸出緩沖模塊包括出口模塊和標本儲存接收緩沖區，出口模塊用于接收需人工復檢標本以及離心完畢的非在線檢測標本。標本儲存接收緩沖區可進行在線自動復檢，當LIS審核報告時，確認某一項目復檢后，即向該模塊發出復檢指令，將需要復檢的標本送入復查回路，并送至分析系統進行復檢。
5.臨床實驗室信息系統， （laboratory information system， LIS）
實時完成從醫院信息系統（hospital information system，HIS）下載患者資料、試驗請求信息、上傳標本在各模塊的狀態、標本架號位置、分析結果、通訊情況等。
全實驗室自動化（TLA）是將眾多模塊分析系統整合成一個實現對標本處理、傳送、分析、數據處理和分析過程的全自動化。標本在TLA可完成臨床化學、免疫學、血液學等亞專業的任一項目檢測。全實驗室自動化包括：自動化標本處理、標本自動傳送和分選至相應的分析工作站、自動分析、利用規范的操作系統軟件對分析結果進行審核、儲存已分析的標本并能隨時對儲存標本重新進行測試。
實驗室自動化流水線作為臨床檢驗醫學發展的必然趨勢，勢必對實驗室的管理和發展產生深遠影響。它的引入不僅是提高工作效率，減少實驗室運行成本，更重要的是建立一個實驗室標準操作平臺，提高了實驗室管理水平和服務質量，以高質量的檢測報告更好地服務患者，服務臨床科室，服務于醫院的長遠發展
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【關鍵詞】 梅毒螺旋體； 血清學檢測； 化學發光； 核酸檢測
梅毒是國家規定的血液篩查的項目之一，在乙肝、丙肝、艾滋三個項目已經開始采用核酸篩查血液時，梅毒檢測現階段有哪些更好的方法可以用在血液篩查中提高血液篩查效果呢？最近20多年，隨著科學技術的迅速發展，梅毒的檢測方法與技術也取得了長足進步，不僅表現在檢測試劑的靈敏度和特異性不斷提高上，還表現在化學發光技術與核酸檢測技術（NAT）的引入。筆者現就梅毒螺旋體的實驗室檢測技術做一評述。
1使用類脂質抗原的梅毒螺旋體
血清學檢測技術＼[1＼]此類試驗主要包括VDRL、USR、RPR、TRUST等，其中VDRL和USR需要使用顯微鏡觀察結果，RPR和TRUST用肉眼觀察結果。
1.1VDRL（性病研究實驗室試驗）
20世紀50、60年代最為常用的梅毒血清學試驗。反應素（梅毒螺旋體破壞機體組織過程中，機體產生的相應抗體）與抗原（從牛心中提取的心磷脂和從雞蛋黃中提取的卵磷脂及膽固醇等有效成分）發生反應，試驗時的搖動，使得反應素與抗原反應，形成的顆粒互相粘附，形成顯微鏡下可見的凝集沉淀，即為陽性。VDRL試驗有幾個缺點，即抗原需要每日配置；血清標本需加熱滅活；要在顯微鏡下觀察結果。因此，后來又推出了改良的USR和RPR。
1.2USR（不加熱血清反應素試驗）
本方法對VDRL抗原進行了改良，即將VDRL抗原稀釋后，再將抗原懸液離心，然后在沉淀物中加入含有EDTA-Na2即氯化膽堿等的緩沖液。EDTA可使抗原半年內不變性，氯化膽堿可以滅活補體，這樣就無需每天配置抗原，也無需血清加熱滅活，但仍需顯微鏡下觀察結果。
1.3RPR（快速血漿反應素環狀卡片試驗）
本方法是在USR抗原的基礎上，加入特制的活性炭顆粒，這樣，抗原抗體反應呈現出黑色的凝集顆粒，在白色紙片上，肉眼易于觀察。
1.4TRUST（甲苯胺紅不加熱血清試驗）
本方法是在前述抗原試劑中加入了甲苯胺紅。甲苯胺紅是一種顆粒均勻的化學染料，陽性結果呈現出紅色的凝集顆粒，更加便于觀察。目前，用于梅毒篩查的常用方法是TRUST和RPR。
上述4種試驗都使用類脂質抗原，采用凝集反應方法測定，操作簡單快速，但4種方法的特異性較差。多種疾病如類風濕關節炎、紅斑狼瘡等，會出現生物學假陽性。有報道在沒有梅毒感染史的正常人群中上述實驗會有0.1%的陽性率。TRUST方法曾經用于血液篩查，但從2000年起逐漸停用，取而代之的是靈敏度和特異性更高的酶免方法。
2使用密螺旋體抗原的梅毒螺旋體
血清學檢測技術此類試驗是梅毒特異性抗體檢測試驗，比較常用的有如下幾種。
2.1TPHA（梅毒螺旋體血球凝集試驗）
本實驗是以梅毒螺旋體作為抗原的間接血細胞凝集試驗。所用抗原為將梅毒螺旋體nichols株經超聲裂解后得到的可溶性抗原成分，用其致敏火雞或羊紅細胞，然后用Reiter株（無毒株）制成的吸收劑稀釋血清，吸收血清中的非特異性抗體。經過上述處理后TPHA試劑的特異性和敏感性均較高。本試驗無需特殊設備，尚未實現自動化檢測，試驗中可發生自凝現象，需引起重視。由于TPHA試劑成本較高，且不能實現批量自動化檢測，因此本方法暫不適合用于血液篩查。
2.2TPPA（梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗）
本實驗原理與TPHA類似，其所用凝集顆粒為明膠顆粒而非紅細胞。TPPA在2002年為美國疾病預防控制中心推薦用作梅毒確證試驗，其靈敏度和特異性均較高，但試劑價格較貴。據文獻報道，TPPA與ELISA檢測結果之間符合性很好＼[2，3＼]。
有報道稱TPPA試驗可以實現自動化檢測＼[2＼]，但未見TPPA試驗自動化的明確報道。TPPA的自動化檢測也是筆者科研立項的題目。如果TPPA可以實現自動化檢測，那本方法是很適宜用作血液篩查的。應用TPPA作為血液篩查方法其意義不僅在于它是一項確認試驗，還在于進行獻血者告之時給予肯定的結果，從而避免引起各種糾紛。
2.3ELISA（酶聯免疫吸附試驗）
本方法所用試劑經過十余年的發展，現采用基因工程的方法，得到高純度的梅毒螺旋體外膜蛋白作為抗原，大大提高了試劑的特異性。用于檢測TP的IgG和IgM抗體。大量的試驗表明其與TPPA，TPHA有較好的相關性＼[2，3＼]。本試驗操作簡單，可實現自動化檢測，是梅毒血清學診斷試驗的首選方法。現階段血液篩查要求使用兩個不同廠家生產的試劑進行篩查，本方法應用已經十分成熟。
2.4金標法
本法是以基因工程生產重組純化的TP外膜蛋白，采用膠體金標法和免疫層析技術進行TP抗體的檢測，該方法快速，簡便，但有假陽性的結果，需做進一步的確認試驗。本方法主要用于街頭血液TP的快速篩查。
2.5FTA-ABS（熒光螺旋體抗體吸附試驗）
本試驗為定性試驗，是公認的“經典”血清學試驗。它是將Nichols株抗原涂在玻片上，然后用Reiter株制成吸收劑加入待測血清中，30min后將混合血清加在涂有抗原的玻片上37℃孵育30min，然后用PBS緩沖液沖洗晾干，加上熒光素標記的抗人IgG，37℃孵育后沖洗晾干，最后用熒光顯微鏡觀察結果。由于本試驗需要熒光顯微鏡，以及不能進行自動化檢測，因而不適合應用于血液篩查中。
2.6WB（蛋白印跡技術）
20世紀80年代蛋白印跡試驗逐漸發展起來，它是一種膜上免疫測定技術。首先將梅毒螺旋體Nichols株菌體細胞用超聲波破碎，再使用聚丙烯酰胺凝膠電泳將梅毒螺旋體各種抗原成分分開形成不同區帶，經電轉印可將這些條帶轉移到硝酸纖維素膜上作為抗原，最后用酶標技術檢測病人血清中的相應特異抗原。如果出現特異性區帶15.5KD和45KD，這時即可確診梅毒。這種方法通常作為篩查陽性標本的確認試驗。RPR， FTA-ABS，和TPHA，TPPA等試驗出現的假陽性，用本實驗檢測均為陰性，有研究表明本方法要優于上述這些方法，是一種很不錯的確認試驗。
3化學發光免疫分析法
本法是化學發光法和免疫分析法結合的產物，是將具有高靈敏度的化學發光測定技術與高特異性的免疫反應相結合，它采用化學發光反應試劑標記抗原或抗體，等其與待測物經過一系列反應后，測定發光強度以確定待測物的含量。該方法廣泛用于各種抗原、抗體、酶、藥物等物質的檢測，是一項最新的免疫測定技術＼[4＼]。在檢測梅毒抗體方面，三甲醫院臨床實驗室逐漸采用化學發光免疫分析儀進行檢測，在近幾年的文獻中多有報道，其結果與TPPA、ELISA等符合性較好＼[5，6＼]。由于其自動化程度高，檢測快速，靈敏度特異性與TPPA持平或更高＼[5＼]，因此在血液篩查檢測中也是一個很好的選擇，其唯一不足之處在于檢測成本較高。
4PCR（聚合酶鏈反應）
經過持續不懈的努力，對于梅毒螺旋體的基因結構已經清楚＼[7＼]，是由1，138，006個堿基對組成的環狀DNA鏈，有1041個開放讀碼框架，已經發現TP膜抗原有22種，內鞭毛蛋白36種，其中外膜蛋白47KD蛋白和內鞭毛37KD蛋白具有高度免疫原性。以下就常用PCR的方法做一介紹。
4.1常規PCR
常規PCR首先要選取適宜的靶基因進行擴增。早在1990年，國外有學者使用tmp基因作為靶基因來設計相應引物，之后又曾嘗試過bmp、47Kda等基因，但效果均不理想。2000年時，經研究比較發現，polA基因具有較高的特異性和敏感性＼[8＼]，隨后將其用于引物設計。經過臨床試驗驗證，其敏感性和特異性達到95.8%和95.7%，效果顯著。常規PCR后期工作比較繁瑣，因其需要做凝膠電泳。本試驗需要重點控制的環節是防止擴增產物受到污染。
4.2多重PCR
本方法在常規PCR的基礎上進行了改進。在使用靶基因作為引物設計上采用了多個特異性抗原基因設計多個引物同時擴增幾條DN段。試驗的反應原理、反應試劑、操作過程都與常規PCR一樣。有學者應用多重PCR檢測梅毒螺旋體感染者的標本后再與確認PCR比較，其一致率達99.3%，而且該方法很適合在常規實驗室使用＼[9＼]。
4.3實時熒光定量PCR＼[10＼]
本方法是在PCR反應體系中加入熒光基團，利用對熒光信號積累的實時檢測來監測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。Holland及其同事最早提出了TaqMan原理＼[11＼]。利用這一原理，設計出了TaqMan熒光探針，使用實時熒光PCR儀實時檢測熒光信號。在TaqMan熒光探針的基礎上，進一步又發展了MGB探針＼[12＼]。我國學者徐瑾等構建了重組質粒PMD18-T-TP，建立了利用MGB-Taqman探針的實時熒光定量PCR＼[13＼]。幾年之后，Leslie等使用改進的實時熒光定量PCR與血清學方法比較，結果Real-Time PCR的敏感性和特異性均較高。與常規PCR相比，實時熒光定量PCR不僅不需要電泳確證，因其采用閉管熒光檢測，還大大減少了假陽性。實時熒光定量PCR的過程自動化程度高，其高靈敏度和特異性也使其廣泛應用于醫學檢測的各領域。
4.4巢式PCR
又稱二次PCR，也即進行兩次擴增。本方法首先用外引物進行第一輪PCR，利用第一次擴增的DNA序列內部的一對引物再次擴增。有報道稱巢式PCR可檢測1.6fg的TP DNA，因此適用于檢測血清等標本中微量的梅毒螺旋體。多名學者設計試驗對巢式PCR與常規PCR、血清學方法進行比較＼[14＼]，實驗結果顯示巢式PCR與血清學方法無顯著性差異，但與常規PCR有顯著性差異。由于巢式PCR使用了兩對引物進行了兩次擴增，其敏感性和特異性均得到了增強，故可以作為血清學方法的補充用于梅毒螺旋體的診斷。
4.5逆轉錄PCR（RT-PCR）
本方法首先是提取目標細胞中總RNA，利用mRNA做為模板，反轉錄生成cDNA，然后將cDNA做為模板擴增，即可獲得目的基因。雖然檢測結果優于常規PCR，但其操作較常規PCR繁雜，注意事項較多，故不利于推廣使用。
梅毒是一種由蒼白密螺旋體引起的傳染病，最近幾年發病率逐年上升，這種情況對輸血安全構成了嚴重威脅。實驗室檢測梅毒的方法較多，梅毒研究中常使用WB、TPPA和PCR三種方法；臨床實驗室常用的方法有ELISA、TRUST、TPPA、化學發光法等＼[15＼]；血液篩查是使用不同廠家的兩種ELISA試劑進行。為了提高血液篩查水平，根據不同實驗的特點，建議在血液檢測中使用TPPA或化學發光法篩查梅毒，以便更好的保證輸血安全。
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1如何實現自身抗體檢驗質量的真正提升
1．1自身抗體的室內質控問題除了室間質評，每個實驗室的室內質控也是保證檢驗質量的重要環節。目前多數檢驗項目都可以直接購買國際或國內標準化質控品，但自身抗體的檢測仍缺少標準化的質控品，檢驗質量很難保證。每個實驗室要想保證前后檢驗結果的縱向可比性，應該自建室內質控品，特別是弱陽性室內質控品，并且在實驗室不同檢驗人員之間實現可比性。這種方法在國際或國內統一的標準化質控品尚未研發或普及之前，可以作為各個實驗室提高檢驗結果穩定性的一個較好手段，也已納入最新版的CNAS文件。
1．2不同檢測方法間的差異問題同一實驗室不同檢測方法在檢測相同或相似的項目時偶爾會出現結果不一致的問題。如IIF法檢測ANA有不同核型，在做抗ENA抗體確認實驗時，不同核型會對應相應特異性抗原的抗體，如細顆粒型常對應抗SSA/SSB抗體、粗顆粒型常對應抗RNP/Sm抗體、均質型常對應抗dsDNA/組蛋白/核小體等抗體;IIF法檢測AMA與免疫印跡法或ELISA法檢測的抗AMA-M2抗體相對應［4-5］。但實際檢測結果常出現不一致的現象，一種方法陽性，對應的方法卻陰性。對于這種現象有些已經過深入研究，得到了比較滿意的解釋。如出現ANA細顆粒型陽性，抗SSA/SSB抗體陰性時，可以解釋為Hep-2細胞成分復雜，可能是其他成分而非SSA/SSB引起此核型;反之，抗SSA/SSB抗體陽性而ANA陰性時，則可解釋為SSA/SSB抗原在Hep-2細胞制作基質時容易漏出，無法檢測。但有些現象則難以闡釋，如抗AMA-M2抗體陽性時，AMA陰性，只能籠統地解釋為方法學差異。其原因也確實可能是廠家試劑生產過程中的問題。即使檢測同一項目，不同方法間也有不一致的現象。如IIF法檢測抗dsDNA抗體特異性很高但不夠敏感，ELISA和免疫印跡法檢測則可以提高敏感性，但假陽性又會增加。因此，國際最新的ANA應用推薦指南也建議對于抗dsDNA抗體的檢測結果應標明檢測方法［9］。如何協調方法間的不一致，需要更豐富的檢驗經驗，更充分地與臨床溝通和更深入地進行相關研究。
2加強與臨床醫生及患者的交流溝通
做好與臨床醫生或患者溝通是分析前和分析后質量控制過程中的一個不可或缺的環節，對保證和持續改進檢驗質量具有極為重要的作用。但目前臨床與檢驗之間缺乏雙向溝通的意識，出現檢驗質量差錯時，在責任認定上相互指責。在自身抗體的檢測中，加強與臨床醫生或患者溝通，至少可以發揮以下幾個重要作用。
2．1有利于加深臨床醫生對檢驗工作的理解和信任自身免疫性疾病特別是自身免疫性風濕病臨床表現比較復雜，很多檢驗工作者對這些疾病的臨床知識掌握不夠，沒有信心與臨床溝通，這樣有時會造成臨床醫生對自身抗體項目的忽視，開申請單時漏掉部分有用的自身抗體項目，甚至造成臨床醫生對檢驗結果的不理解或誤解。例如，筆者所在單位就曾有臨床醫生發現本實驗室抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCA)檢驗結果與其他單位不一致，給臨床治療帶來困惑和干擾。本實驗室用不同方法再次檢測，結果保持一致，并向臨床解釋了各單位實驗室之間檢測結果出現差異的可能原因，使問題得到滿意解決，加深了臨床醫生對檢驗工作的理解和信任。
2．2有利于引導患者正確就醫，得到及時準確診治當前，大醫院分科細密，醫生看病專科化，對其他科室疾病缺乏認識，導致誤診或延遲診治。尤其是自身免疫性疾病，臨床表現多樣化，更易使患者無所適從。自身抗體的檢測有助引導患者正確就醫，例如，原發性膽汁性肝硬化(PBC)臨床癥狀并不特異，可表現為疲勞、皮膚瘙癢、貧血甚至關節痛，患者首選就診科室常非對口的消化內科，而是皮膚科、風濕科甚至血液科。這些科室的醫生最常開的檢驗項目是ANA等自身抗體，檢驗結果大都ANA陰性，但常會AMA陽性，該項目是PBC特異診斷指標之一。及時與患者和臨床溝通，會幫助PBC患者得到正確診治，科室也贏得口碑。
2．3有利于檢驗人員拓寬視野，加深對自身免疫性疾病的認識與臨床溝通，可以督促檢驗人員學習和掌握檢驗知識，并從臨床中學到相關疾病的臨床情況，了解臨床醫生在診治自身免疫病的過程中對自身抗體的需求情況，可以有的放矢提高自身抗體的臨床應用效能。
3面對新技術的思考
自身抗體檢測新技術主要包括兩大類，一類是能對目前常規檢測技術進行整合和自動化的檢測系統，另一類是當前尚未用于臨床常規檢測的新技術。
3．1自動化檢測系統的建立自身抗體檢測是臨床實驗室中為數不多、仍采用手工操作的項目，實現自動化，是檢驗工作者夢寐以求的，大量的研究也正朝著這個方向努力。其實，一些免疫印跡法、ELISA、IIF法自動加樣儀器已廣泛用于各大醫院臨床實驗室，甚至將幾種加樣方法整合到一臺儀器，IIF法結果自動判斷系統也在部分醫院得到了應用，使得自身抗體檢測操作過程的自動化水平得到了明顯提高。但IIF結果自動判斷系統對于未知核型的鑒定以及ANA滴度和復雜核型的判斷準確性很低，仍然需要人工判斷。因此，這種自動化檢測系統還只能起到初篩作用，結果判讀仍需人工。但相信在不久的將來，隨著各種不同滴度和核型的ANA圖譜日益豐富和完善，自動化判讀的準確性會大大提高，最終應該能替代人工。
